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第三方檢測(cè)PCR實(shí)驗(yàn)室分區(qū)設(shè)計(jì)

  • Jason Peng

  • Product Manager for 第三方檢測(cè)PCR實(shí)驗(yàn)室分區(qū)設(shè)計(jì),Engaged in related product development for 15 years,with a wealth of related technical experience

  • 2022-06-25  |  Visits:


第三方檢測(cè)pcr實(shí)驗(yàn)室分區(qū)設(shè)計(jì).得創(chuàng)實(shí)驗(yàn)室工程專業(yè)從事PCR實(shí)驗(yàn)室工程規(guī)劃,設(shè)計(jì),施工一條路凈化工程公司,歡迎來(lái)電咨詢:027-82289886
我們之前碰到過(guò)一些客戶,說(shuō)做PCR實(shí)驗(yàn)總是出現(xiàn)假陽(yáng)性,明明沒(méi)有加模板最后卻擴(kuò)出了產(chǎn)物。如果這種現(xiàn)象頻頻出現(xiàn),就要注意一下操作環(huán)境了。如果你去百度上搜索“PCR出現(xiàn)假陽(yáng)性了怎么辦”,下面給出的建議一定會(huì)有防止交叉污染這條建議。有人說(shuō)模板DNA是大分子,溶于去離子水中,怎么會(huì)無(wú)緣無(wú)故跑出來(lái)污染環(huán)境呢?小編將會(huì)一一解釋。

一.PCR實(shí)驗(yàn)室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)及壓力控制

PCR實(shí)驗(yàn)室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)
PCR實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有嚴(yán)格的凈化要求,但為了避免各實(shí)驗(yàn)區(qū)之間交叉污染的可能性,應(yīng)采用全送全排的氣流組織形式。同時(shí),應(yīng)嚴(yán)格控制輸送和排氣的比例,以確保每個(gè)試驗(yàn)區(qū)的壓力要求。 1.試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)
實(shí)驗(yàn)區(qū)的主要操作是儲(chǔ)存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合物的制備。用于標(biāo)本生產(chǎn)的試劑和材料應(yīng)直接運(yùn)輸?shù)皆搮^(qū)域,不得通過(guò)其他區(qū)域.試劑原料必須儲(chǔ)存在該地區(qū),并在該地區(qū)制備所需的儲(chǔ)存試劑。
對(duì)個(gè)區(qū)域?qū)饬鲏毫Φ目刂茮](méi)有嚴(yán)格的要求。
2、標(biāo)本制備區(qū)
該地區(qū)的主要操作是保存臨床標(biāo)本和核酸(RNA、DNA)提取、存儲(chǔ)和添加到擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定RNA時(shí)cDNA的合成。
該區(qū)域的壓力梯度要求為:相對(duì)于相鄰區(qū)域的正壓,以避免從相鄰區(qū)域進(jìn)入該區(qū)域的氣溶膠污染。此外,由于在樣品添加過(guò)程中可能會(huì)發(fā)生氣溶膠污染,因此應(yīng)避免在該區(qū)域不必要的行走.
3.擴(kuò)大反應(yīng)混合物的制備和擴(kuò)大區(qū)域
該區(qū)域的主要操作是DNA或 cDNA擴(kuò)大。此外,已制備的DNA合成的模板cDNA(來(lái)自樣品制備區(qū)) 添加和主反應(yīng)混合物(來(lái)自試劑儲(chǔ)存和制備區(qū)) 反應(yīng)混合物的制備也可在本區(qū)進(jìn)行。PCR在測(cè)量中,反應(yīng)管通常必須在第一輪擴(kuò)張后打開。因此,巢式擴(kuò)張具有很高的污染風(fēng)險(xiǎn),必須在該地區(qū)進(jìn)行第二次樣品添加.
該區(qū)域的壓力梯度要求為:相對(duì)于相鄰區(qū)域的負(fù)壓,以避免氣溶膠從該區(qū)域泄漏。為了避免氣溶膠造成的污染,應(yīng)盡量減少在該地區(qū)不必要的行走.個(gè)別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺(tái)進(jìn)行。
4、擴(kuò)大產(chǎn)品分析區(qū)域
該區(qū)域的主要操作是測(cè)量擴(kuò)增片段。如果使用全自動(dòng)封閉分析儀器進(jìn)行檢測(cè),則該區(qū)域不能設(shè)置.
該地區(qū)是擴(kuò)增產(chǎn)物污染的主要來(lái)源,因此該地區(qū)的壓力梯度要求為:相對(duì)于相鄰區(qū)域的負(fù)壓,以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從該地區(qū)擴(kuò)散到其他地區(qū).

PCR實(shí)驗(yàn)室效果圖 PCR實(shí)驗(yàn)室效果圖
   

二.PCR實(shí)驗(yàn)室區(qū)域設(shè)計(jì)

PCR實(shí)驗(yàn)室區(qū)域設(shè)計(jì)
(1)合理設(shè)置各實(shí)驗(yàn)區(qū)域;
(2)每個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域應(yīng)有明顯的標(biāo)記(如醒目的門板或不同的地面顏色等),避免不同實(shí)驗(yàn)區(qū)域的設(shè)備物品、試劑等混淆。
2、系統(tǒng)設(shè)置合理
(1)空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)置合理,盡量采用全送全排空調(diào)系統(tǒng);
(2)嚴(yán)格控制氣流壓力,確保不同實(shí)驗(yàn)區(qū)域的不同壓力要求。

PCR實(shí)驗(yàn)室效果圖 PCR實(shí)驗(yàn)室效果圖
   

三.pcr實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)布局

PCR實(shí)驗(yàn)室布局
   PCR原則上,擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室分為試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增反應(yīng)混合物制備和擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)品分析區(qū)四個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)。為了避免交叉污染,進(jìn)入每個(gè)工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循一個(gè)方向,即只能從試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)域進(jìn)行→標(biāo)本制備區(qū)→反應(yīng)混合物的制備和擴(kuò)大區(qū)域→擴(kuò)大產(chǎn)品分析區(qū)域。試驗(yàn)區(qū)之間的試劑和樣品傳輸應(yīng)通過(guò)傳輸窗口進(jìn)行。

PCR實(shí)驗(yàn)室效果圖 PCR實(shí)驗(yàn)室效果圖
   

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